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不规则抗体筛检卡标准操作程序
来源:大發官方生物    发布时间:2009年11月21日

一、 准备工作

    (一)微柱凝胶试剂卡的准备:观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温

          (18~25℃)平衡,再用专用离心机离心5分钟。

    (二)检测标本的准备:

      1.红细胞悬液的制备:将筛检红细胞或谱细胞配成0.8%浓度的悬液。

      2.血清标本的制备:采集被检对象静脉血,放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心,取上

          清;或者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放    置 12小时,或37℃放置2小时后离心,2000r/min,10

          分钟,取上清(该上清不得有絮状物或沉淀)。

二、操作步骤

1. 将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记;

2. 将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中,各一滴(或50μl);

3. 分别立即加入被检者血清1滴(或50μl);

4. 加样后的试剂卡,置37℃孵育器中孵育15分钟;

5. 使用专用离心机离心5分钟(900rpm2分钟,1500 rpm3分钟),取出肉眼观察结果。

结果判定:根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反应格局来判定结果

例:按Ⅰ(-)Ⅱ(4+)、Ⅲ(-)的实验结果及提供如下的筛检红细胞反应格局来分析

筛检细胞反应格局

编号
Rh-hr
Kidd
MNS
Duffy
Diego
Kell
Lewis
P
D
C
E
c
e
Jka
Jkb
M
N
S
s
Fya
Fyb
Dia
K
k
Lea
Leb
p1
I
+
+
-
-
+
+
+
+
-
-
+
+
-
-
-
+
+
-
+
II
+
-
+
+
-
+
+
-
+
-
+
+
-
-
-
+
-
+
+
III
+
+
-
+
+
+
+
+
-
-
+
+
+
-
-
+
-
+
-

阴性结果用排除法,阳性结果用可能包含法。

以前五种抗原为例:

Ⅰ(-): 可排除D、C、e;

Ⅱ(4+):判断可能含有D、E、c;

Ⅲ(-): 可排除D、C、c、e;

综上,可认为:此样品血清中可能含有-E

三、 注意事项

   1.应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时,一定要用适量EDTA的试管采血液标本,该标

      本不能放入4℃-10℃冰箱保存,以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。

   2.红细胞标本一定不能被细菌污染,否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不

      得不用过夜血或陈旧血,则必须首先用该标本做阴性对照试验,以确定该标本是否可以做本实验。

   3.血清标本:血清标本必须充分去纤维蛋白,否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出,阻碍阴性红细胞沉

      淀,呈假阳性反应。

   4.如在微柱凝胶管中出现溶血现象,强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所致溶血,

      故对此标本一定认真分析,并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。

   5.每日试验前,先取出微柱凝胶卡放置至室温。

   6.试剂卡应放在18-25℃储存,如若长期放在4℃冰箱,建议每1-2个月取出,用专用离心机离心一次,

      防止干胶或产生气泡。

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